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本制品是基于随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记得到的探针长度一般在200～400nt之间(如果模板长度在1kb以上)，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。

Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示。

• 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
  
• 使用无外切活性的Klenow exo^- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解，探针产量更高。
  
• 快速，最快1小时即可完成标记反应。
  
• 所需模版DNA量少，模板可以是线状或环状的、也可以是单链或双链的，但长度必须在100bp以上。

• 在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：
  

  成分	用量
  模板DNA	50～150ng
  2×随机引物生物素标记反应液	10μL
  超纯水	至19μL

  • 非同位素标记基团(如生物素和地高辛)疏水性强，易与塑料离心管表面非特异性结合，所以要硅化塑料离心管。模板DNA并非越多越好，否则没有标记的模板DNA在杂交时会竞争性地抑制标记DNA跟靶分子的杂交，反而降低杂交信号强度。
• 沸水浴10分钟，或在PCR仪上100℃加热10分钟彻底变性模板DNA，结束后需要立即放冰上待用。不能缓慢降温，否则变性的模板DNA单链又会杂交形成双链。
  
• 离心数秒使所有液体集中在管底，再加入1μL Klenow exo^- DNA聚合酶。
  
• 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，离心数秒使所有液体集中在管底。
  
• 37℃保温1～20小时。标记效率跟模板量和保温时间相关，杂交需要一定量的探针，同时在杂交时探针模板比越高，没有标记的模板DNA对杂交的竞争性抑制越低。用户需要在这两者之间进行折衷选择。具体可以参考下表：
  

  模版DNA用量 (ng)	1小时后探针合成量 /探针模板比	20小时后探针合成量 /探针模板比
  10	80ng/8	900ng/90
  30	150ng/5	1350ng/45
  100	350ng/3.5	1650ng/16.5
  300	750ng/2.5	2200ng/7.3
  1000	1300ng/1.3	2600ng/2.6
  3000	1600ng/0.53	2600ng/0.87

• 反应结束后，100℃加热5分钟使DNA聚合酶变性，同时使DNA探针变性成单链。
  变性后的标记反应液可以放-20℃长期保存，也可以直接加入到杂交反应液中进行杂交。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
  
  • 本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，不要用酚抽提法纯化非同位素标记的DNA探针，因为这些标记分子(如生物素或地高辛等)疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失。只能选择乙醇直接沉淀或Sephadex G50过柱回收(需另购柱式探针纯化试剂盒)。对比活高的同位素标记探针，由于同位素其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。